פיתוח שיטת ELISA עקיפה לזיהוי תסמונת שלשול חריף חזירי וירוס IgG נוגדן מבוסס על חלבון ספייק רקומביננטי

Porcine Acute Diarrhea Syndrome Coronavirus (SADS-CoV) הוא נגיף קורונה חזירי פתוגניים חזירי אשר יכול לגרום לשלשול מימי אצל חזרזירים שזה עתה נולדו ולגרום להפסדים כלכליים משמעותיים לתעשיית החזירים.נכון לעכשיו, אין שיטה סרולוגית מתאימה להעריך את היעילות של זיהום וחיסון SADS-CoV, ולכן יש צורך דחוף להשתמש במבחן יעיל לאנזימים מקושר אימונוסורבנט (ELISA) כדי לפצות על מחסור זה.כאן, נבנה פלסמיד רקומביננטי המבטא חלבון SADS-CoV spike (S) שהתמזג עם תחום IgG Fc אנושי לייצור baculovirus רקומביננטי ומתבטא בתאי HEK 293F.חלבון S-Fc מטוהר עם שרף חלבון G ושומר על תגובתיות עם נוגדנים נגד Fc ואנטי-SADS-CoV.לאחר מכן נעשה שימוש בחלבון S-Fc לפיתוח ELISA עקיף (S-iELISA) ולייעל את תנאי התגובה של S-iELISA.כתוצאה מכך, על ידי ניתוח ערך OD450nm של 40 SADS-CoV סרה שלילית שאושרה על ידי בדיקת אימונופלואורסצנציה (IFA) ו-Western blotting, ערך החתך נקבע ל-0.3711.מקדם הווריאציה (CV) של 6 הסמים החיוביים SADS-CoV בתוך ובין ריצות של S-iELISA היו כולם פחות מ-10%.בדיקת התגובתיות ההצלבה הראתה כי ל-S-iELISA אין תגובתיות צולבת עם סרחי וירוס חזירים אחרים.בנוסף, בהתבסס על זיהוי של 111 דגימות סרום קליניות, שיעור המקריות הכולל של IFA ו-S-iELISA היה 97.3%.בדיקת נטרול הנגיף עם 7 ערכי OD450nm שונים של סרום הראתה כי ערך ה-OD450nm שזוהה על ידי S-iELISA נמצא בקורלציה חיובית למבחן נטרול הנגיף.לבסוף, S-iELISA בוצעה על 300 דגימות סרום של חוות חזירים.ערכות מסחריות של נגיפי enterovirus אחרים של חזירים הראו ששיעורי ה-IgG החיוביים של SADS-CoV, TGEV, PDCoV ו-PEDV היו 81.7%, 54% ו-65.3%, בהתאמה., 6%, בהתאמה.התוצאות מראות שה-S-iELISA הוא ספציפי, רגיש וניתן לשחזור, וניתן להשתמש בו כדי לזהות זיהום SADS-CoV בתעשיית החזירים.מאמר זה מוגן בזכויות יוצרים.כל הזכויות שמורות.